線性聚乙烯亞胺PEI MW40000說(shuō)明書(shū)

上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí)，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國(guó)產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來(lái)讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國(guó)生物制造企業(yè)，圓夢(mèng)中國(guó)。

產(chǎn)品描述：

BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW25000 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chǎn)品，因其較高的轉(zhuǎn)染效果，已廣泛應(yīng)用于AAV，LV和重組蛋白等工業(yè)化生產(chǎn)。

聚乙烯亞胺是一種具有較高陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔兩個(gè)碳原子，即每第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿"體(proton sponge)，因此，非常容易結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子，形成帶正電荷的復(fù)合物顆粒，該顆粒與細(xì)胞表面陰離子結(jié)合，很容易通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞；并且可抵御溶酶體的降解作用，從而提高核酸分子的表達(dá)水平。

基本信息：

CAS： 9002-98-6

分子式： (CH2CH2NH)n

分子量： 25,000

熔點(diǎn)： 73-75℃

溶解性： 溶于熱水，低pH值的冷水，甲醇和乙醇；

形式： 白色固體

生物毒性： 未知

安全防護(hù) 手套及口罩

存儲(chǔ) PEI 內(nèi)含自由氨基，建議開(kāi)封后 4℃干燥保存，減緩氧化過(guò)程。

效期：3年 

運(yùn)輸： 常溫

特點(diǎn)：大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)反饋，細(xì)胞通用性好，有非常好的轉(zhuǎn)染效果，尤其對(duì)293，CHO細(xì)胞系有特別顯著的轉(zhuǎn)染效果。

配置方法：

轉(zhuǎn)染操作流程：(貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)

    1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化細(xì) 胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置 入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

    2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升 至室溫。依據(jù)表 1 所示，用 Opti-MEM ITM或其他適合的無(wú)蛋白培 養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線 性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶(hù)自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批 DNA 比例可 能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉(zhuǎn)染 試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

    3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI 復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在 無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴 DNA-PEI 復(fù)合 物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

    4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染 后最快 7 h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。

    5. 轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃孵育過(guò)夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

轉(zhuǎn)染操作流程：(懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)

    1. 轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備：懸浮細(xì)胞傳代接種于適量含懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調(diào)整細(xì)胞密度（例100mL培養(yǎng)瓶，1X10 ⁶ cells/mL），然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng)，2~4小時(shí)后可以進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

    2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

    3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞：將PEI-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物逐滴加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，搖勻后旋緊瓶口放回?fù)u床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測(cè)。

    4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：轉(zhuǎn)染后一般24-72h即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定適合檢測(cè)時(shí)間。

    5. 如果要獲得更多的蛋白產(chǎn)量，有文獻(xiàn)表明轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，可以適當(dāng)稀釋細(xì)胞，稀釋比例參考范圍（1:1—1:5）之間，可以增加蛋白產(chǎn)量，稀釋效應(yīng)與最佳稀釋比率應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

產(chǎn)品背景：

BIOHUB 生產(chǎn)的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,分子量分別為 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉(zhuǎn)染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達(dá)系統(tǒng)中，相比于市面上的脂質(zhì)體 78BioPEI 都表現(xiàn)出高的蛋白表達(dá)量（無(wú) 論是 96 孔板還是 100L 的細(xì)胞反應(yīng)器），以及更小的細(xì)胞毒性、更高的轉(zhuǎn)染效和更高的可 重復(fù)性，并且十分經(jīng)濟(jì)的高性?xún)r(jià)比轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品具有以下特點(diǎn)：

1.轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低；  蛋白表達(dá)量高；

2.節(jié)約成本：BIOHUB 78 PEI轉(zhuǎn)染試劑 ，進(jìn)口品質(zhì)，親民價(jià)格，至少能夠降 40% 的轉(zhuǎn)染試劑總成本；

3.適用于 HEK293 等真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；

4.適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；

5.適用于有血清和無(wú)血清的轉(zhuǎn)染條件；

6. 無(wú)機(jī)試劑，無(wú)動(dòng)物源成分；

7. 產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴(yán)格；

8. 工藝流程適用范圍廣，容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應(yīng)器。

產(chǎn)品反饋：

注意事項(xiàng)：

1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多，詳細(xì)用量可試加一點(diǎn) ,攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。 

4.一定要溶解充分，溶解不充分會(huì)影響后續(xù)的轉(zhuǎn)染效率.

5.冷凍后可能會(huì)影響其后續(xù)轉(zhuǎn)染效果。

特別提醒：初次使用 78PEI 進(jìn)行不同基因轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)先做預(yù)試，優(yōu)化出適合自己實(shí)驗(yàn)的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常篩選范圍在 1:1 到 5:1 之間，如果之前用過(guò)Polysciences品牌的 PEI，我們的活性是其1.5倍左右，用 78BioPEI 時(shí)應(yīng)適當(dāng)降低使用濃度。