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Fluorogenic Substrates

熒光底物

基于 ANSN 的熒光底物
的一般結構圖解了基于6-氨基-1-萘磺酰胺 (ANSN) 熒光底物的一般結構。在本化合物家族中，R 1 是三肽，其COOH-末端殘基通常是精氨酸。R2和R3可以是氫、烷基、芳基或環(huán)烷基。虛線表示各種絲氨酸蛋白酶水解的位點。

含有熒光報告基團 6-amino-1-naphthalene-sulfonamide (ANSN) 的底物是用于監(jiān)測各種絲氨酸蛋白酶的酶活性的有用化合物 (1-12)。在此類化合物中，ANSN 報告基團與短的三肽序列相連（在 R1 位置）。肽序列旨在優(yōu)化酶和底物之間的相互作用。可以添加到 R2 和 R3 位置的其他成分反映了 P' 亞位點位置的變化，并且通常會影響底物的動力學參數(shù)。作為有效底物的化合物在三肽和 ANSN 基團之間水解。一旦從肽部分切下，ANSN 基團的相對熒光就會增加約 1000 倍。

下頁確定的動力學特性將有助于選擇合適的底物。已證明 ANSN 底物對因子 VIIa (1-5,7,9,10,12) 的分析特別有用。盡管單獨的因子 VIIa 的底物水解速率相對較慢，但當組織因子加入分析系統(tǒng)時，幾種化合物（例如化合物 SN-17a）的 kcat 會發(fā)生很大變化。

使用信息：
基于 ANSN 的底物以 DMSO 中的 10mM 儲備溶液形式提供，通?？捎糜诜治?400 nM 至低至 50pM 濃度范圍內的酶。ANSN 底物通常以 50 到 100 µM 的最終濃度使用，并且可以在大多數(shù)生理緩沖液（即 TBS、HBS、PBS 等）中稀釋到該最終濃度。反應（熒光的相對變化）可以使用標準熒光計或熒光讀板器進行監(jiān)測。動力學或終點模式可與設置在以下波長（激發(fā)=352nm，發(fā)射=470nm）的儀器一起使用。通過在發(fā)射光束中使用 390 至 450 nm 長通截止濾波器，可以最大限度地減少光偽影。

下表列出了每種底物的動力學特性，表下方列出了期刊參考文獻列表作為使用示例。

DMSO 中的儲備底物溶液應在 4°C 或更低的溫度下冷凍儲存，并應避光。在這些條件下，化合物將保持穩(wěn)定超過一年。

**下表的關鍵字：K _m = µM；k_貓= s ^-1 ; k _cat /K _m = M ^-1 s ^-1 x 10 ^-5 ; ND=未確定

• SN-5 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	D-AFK-ANSNH-iC 4 H 9 .2HBr
  對...有用	對纖溶酶有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	ND	ND	ND	ND	ND	ND	ND	130
  K貓	ND	ND	ND	ND	ND	ND	ND	3.7
  K貓/K M	ND	ND	ND	ND	ND	ND	ND	0.28

•  SN-7 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	Mes-D-LGR-ANSN(C 2 H 5 ) 2
  對...有用	對因子 Xa 有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	31	180	200	125	580	113	ND	ND
  K貓	0.63	0.007	0.79	36	15	0.055	ND	ND
  K貓/K M	0.2	ND	0.04	2.9	0.26	0.005	ND	ND

•  SN-13a 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	D-LPR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HCl
  對...有用	對因子 XIa 有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	0.5	300	300	171	75	45	98	ND
  K貓	19	0.07	4.5	3.3	53	52	0.31	ND
  K貓/K M	380	0.002	0.15	0.19	7.1	12	0.03	ND

•  SN-17a 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	D-FPR-ANSNH-C 6 H 11 • 2 HCl
  對...有用	對凝血酶和 VIIa 有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	0.4	150	330	150	ND	7.8	36	ND
  K貓	17	0.05	8.4	0.32	ND	6.6	0.074	ND
  K貓/K M	430	0.004	0.25	0.02	ND	8.6	0.02	ND

•  SN-17c 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	D-FPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl
  對...有用	對因子 VIIa 有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	ND	186	102	ND	ND	53	ND	ND
  K貓	ND	0.11	2.7	ND	ND	21	ND	ND
  K貓/K M	ND	0.006	0.26	ND	ND	4	ND	ND

•  SN-18 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	Boc-L-(pF)FPR-ANSNH-C 2 H 5
  對...有用	對 tPA 有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	3.7	50	217	ND	ND	ND	71	ND
  K貓	44	0.008	0.88	ND	ND	ND	1.03	ND
  K貓/K M	120	0.002	0.04	ND	ND	ND	0.15	ND

•  SN-20 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	Boc-L-FPR-ANSNH-C 2 H 5
  對...有用	對凝血酶有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	17	ND	ND	100	ND	540	47	ND
  K貓	58	ND	ND	0.31	ND	2.2	0.011	ND
  K貓/K M	34	ND	ND	0.003	ND	0.04	0.002	ND

•  SN-45 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	L-EGR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HBr
  對...有用	對因子 XIa 有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	100	ND	ND	110	225	440	ND	ND
  K貓	2.5	ND	ND	0.2	82	17	ND	ND
  K貓/K M	0.25	ND	ND	0.02	3.6	0.39	ND	ND

•  SN-54 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	BOC-D-VLR-ANSNH-C 4 H 9
  對...有用	對 aPC 有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	19	42	170	19	ND	3.9	ND	ND
  K貓	0.055	0.007	1.6	0.055	ND	2.1	ND	ND
  K貓/K M	0.03	0.002	0.09	0.03	ND	5.2	ND	ND

•  SN-59 6-amino-1-naphthalenesulfonamide-based (ANSN) 熒光底物

   

  結構	D-VPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl
  對...有用	對凝血酶和 aPC 有用

  公式	DMSO
  專注	10 毫米

  動力學性質	Ⅱa	VIIa	VIIa/TF	Xa	夏	個人電腦	多巴胺	纖溶酶
  ?中號	2	89	52	160	520	54	110	ND
  K貓	110	0.019	0.76	3.3	92	72	0.71	ND
  K貓/K M	550	0.002	0.14	0.21	1.8	13	0.065	ND