Bioenno Lifesciences 是Bioenno Tech，LLC的子公司  。 Bioenno Lifesciences成立于2010年，已在美國加利福尼亞州圣安娜建立了研究，工程和制造工廠。自2011年以來，我們一直在為醫(yī)學(xué)界提供用于神經(jīng)科學(xué)研究的*的醫(yī)療套件，并且一直在積極開發(fā)新技術(shù)。我們?yōu)榻M織的客戶群提供服務(wù)，這些組織包括哈佛醫(yī)學(xué)院，約翰霍普金斯大學(xué)，F(xiàn)DA，NIH，倫敦國王學(xué)院（英國），科隆大學(xué)（德國）和INSERM（法國）。

Bioenno 003760說明書

sliceGolgi Kit (Cat#003760)

• $39800$398.00

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Bioenno  還提供  sliceGolgi  套件，以及其他  固定劑 套件。該  sliceGolgi 套件的設(shè)計上運行的片/段高爾基染色。可以在自由漂浮的部分（厚度為50到400微米）上進行浸漬和染色。附加的  固定  試劑盒使用Bioenno醛來處理其他樣品。這些試劑盒已經(jīng)在大鼠和小鼠的腦部進行了廣泛的測試，包括：

• 使用組織斬波器快速準(zhǔn)備新鮮收獲的切片，例如急性切片。
• 器官型切片培養(yǎng)，  例如 培養(yǎng)的海馬切片和培養(yǎng)的皮質(zhì)切片。
• 注入人工腦脊液（ACSF）的切片 ，已完成電生理記錄和給藥。
• 通過灌注或浸沒從 用生物烯醛固定劑 （目錄號：003780）固定的腦中獲得的切片  。可以在室溫（室溫，15℃– 25℃）下在50?400微米范圍內(nèi)對固定的大腦進行系統(tǒng)切片，并且可以對這些切片單獨進行高爾基染色，單獨進行免疫組織化學(xué)/免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）或?qū)Ω郀柣旧虸CC進行組合。
• 額外的  固定 試劑盒可處理更多樣品。Bioenno建議您購買sliceGolgi試劑盒和固定試劑盒。

所述  sliceGolgi套件 可以被施加到視網(wǎng)膜，脊髓，和培養(yǎng)的細(xì)胞以染色神經(jīng)元過程。

所述sliceGolgi套件產(chǎn)生樹突和棘（參見圖）的兩個可靠和高質(zhì)量的標(biāo)記。在50至200微米厚的切片中，神經(jīng)元的浸漬  速度非常快，在某些情況下僅為2-3天。通常，浸漬需要4-7天，具體取決于切片的年齡和厚度。該試劑盒可以在室溫下的黑暗區(qū)域保存長達12個月。  

高爾基染色和免疫組織化學(xué)/免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）的結(jié)合  

Bioenno Tech已成功將sliceGolgi試劑盒與ICC結(jié)合使用在同一大腦區(qū)域（參見圖4-9）。為了進行高爾基染色和ICC的組合，首先對固定部分進行高爾基染色，然后再進行ICC：

（1）組織處理：先用生理鹽水對動物進行心臟灌注，然后再用Bioenno Tech開發(fā)的  固定劑 （目錄號：003780）進行灌注。從顱骨上解剖大腦，并在4ºC下固定1-3天。然后在室溫下使用振動切片機或類似類型的切片機/切片機將腦切成50?100微米的厚度。將切片收集在0.1M PB（pH 7.4）中，并在4ºC下可以在緩沖液中保存長達一周。  

固定部分可單獨用于高爾基體染色，單獨用于ICC，以及用于高爾基體染色和ICC的組合。

（2）  高爾基染色：  在室溫下使用sliceGolgi試劑盒 對自由漂浮的切片進行高爾基染色  。神經(jīng)元的浸漬可能需要2-5天。

（3）  ICC：  自由漂浮的切片可以接受標(biāo)準(zhǔn)的抗生物素蛋白-生物素復(fù)合物（ABC）方法。通過在含有H 2 O 2的 3,3'-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）中孵育切片，可以看到免疫反應(yīng)產(chǎn)物。

注： 該  sliceGolgi套件 不適用于冷凍組織工作。固定的組織塊在切割前無法冷凍。

產(chǎn)品特色

• 適用于切片/切片的組織（50至400微米厚）
• 在自由漂浮的部分上進行浸漬和染色
• 新型醛  固定劑 和增強浸漬溶液
• 神經(jīng)元的浸漬很快（2-7天）
• 結(jié)合了高爾基染色和免疫組織化學(xué)
• 經(jīng)過驗證的結(jié)果/用戶友好
• 足以容納多達  1,000個腦部切片 （50-400微米厚，尺寸約為1 x 1.5厘米）
• 供體外實驗室使用  
• 專門的技術(shù)支持
• 12個月保修

產(chǎn)品說明和協(xié)議

• sliceGolgi試劑盒協(xié)議
• 固定試劑盒方案

使用sliceGolgi試劑盒（目錄號003760）的可靠結(jié)果 

• 使用sliceGolgi試劑盒的可靠結(jié)果 

樹突狀分支和棘突已被sliceGolgi Kit可靠地浸漬和染色。  

圖1 –額葉皮層第II層中浸漬和染色的神經(jīng)元

所述 sliceGolgi試劑盒 用于浸漬和染色神經(jīng)元中一日齡12（P12）C57BL小鼠的額皮質(zhì)。在200微米厚的切片中，神經(jīng)元的樹突棘（箭頭）被正確標(biāo)記。箭頭指示絲狀偽足狀突起，即未成熟的棘。使用20倍物鏡拍攝圖像。

圖2 –新皮質(zhì)第三層中錐體神經(jīng)元的樹突分支

所述sliceGolgi試劑盒用于浸漬和染色定位于額頂皮質(zhì)的運動區(qū)在20x物鏡錐體神經(jīng)元的樹突傾斜和主支路（干）。C57BL鼠標(biāo)已經(jīng)有12天了。  

圖3 –下丘腦外側(cè)的神經(jīng)元

所述sliceGolgi試劑盒用于浸漬自由浮動的條件下在100微米厚的切片的神經(jīng)元。從P12 C57BL小鼠的下丘腦外側(cè)區(qū)域取出帶有軸突末端的染色神經(jīng)元（20倍物鏡）。在樹突分支上發(fā)現(xiàn)許多絲狀偽足樣突起（箭頭）。  

圖4  –  sliceGolgi Kit與免疫組織化學(xué)/免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）的組合使用

高爾基體染色和ICC的結(jié)合可以同時顯示樹突棘和免疫反應(yīng)產(chǎn)物。通常，首先對自由浮動部分進行高爾基染色處理，然后再進行ICC處理。為了進行高爾基體染色，通過升主動脈向動物灌注0.9％的鹽溶液，然后是新鮮制備的固定劑（目錄號：003780，Bioenno Tech）。從顱骨上解剖大腦，后固定1-3天（4ºC）。然后，使用震動刀將大腦切成50-100μm的厚度，并將切片收集到0.1 M PB（pH 7.4）的組織培養(yǎng)孔中。該sliceGolgi套件      （目錄號：003760）用于浸漬（2-5天，RT）并對樹突（黑色）染色。為了進行ICC，對自由浮動的切片進行標(biāo)準(zhǔn)的抗生物素蛋白-生物素復(fù)合物（ABC）方法。通過將切片在含有0.01％H 2 O 2的 0.04％3,3'-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）中孵育8-10分鐘，可以看到免疫反應(yīng)產(chǎn)物。該圖像是使用4倍物鏡從2個月大的C57小鼠的海馬體上拍攝的。

圖5  –  在同一大腦切片上進行的高爾基染色和ICC

高爾基體染色和ICC結(jié)合：1）向C57小鼠心內(nèi)灌注鹽水，然后用Bioenno開發(fā)的醛固定劑 （目錄號：003780）進行心臟灌注。2）使用sliceGolgi試劑盒對自由漂浮的切片（50微米）進行高爾基染色。浸漬時間僅在22±1ºC下為2天。3）使用標(biāo)準(zhǔn)抗生物素蛋白-生物素復(fù)合物方法處理小白蛋白（PV）的ICC。單克隆小鼠抗PV抗體（1：20,000，MAB1572，Chemicon）的孵育時間為22±1ºC過夜。圖像是使用4倍物鏡從丘腦拍攝的。   

圖6  –  樹突狀分支和PV免疫反應(yīng)性神經(jīng)元

高爾基體染色和ICC在同一大腦切片上進行。使用sliceGolgi Kit在自由漂浮的切片（100 µm）上進行高爾基染色。在22±1ºC下的浸漬時間為3天。圖像是從4個月大的C57小鼠的下眼部拍攝的（63倍物鏡）。 

圖7 –高爾基染色的樹突和免疫標(biāo)記的神經(jīng)元

所述sliceGolgi試劑盒用于浸漬和染色皮層神經(jīng)元的樹枝狀分支在皮層的層III。免疫反應(yīng)性神經(jīng)元在同一區(qū)域可見。圖像是從4個月大的C57小鼠拍攝的（63倍物鏡）。  

圖8 –高爾基染色的皮質(zhì)神經(jīng)元和免疫標(biāo)記的神經(jīng)元

所述sliceGolgi試劑盒用于浸漬和染色神經(jīng)元的樹枝狀分支在皮質(zhì)的更深的層。在厚度為100 µm的切片中，神經(jīng)元的浸漬僅在22±1ºC下進行了2天。免疫反應(yīng)性神經(jīng)元在同一區(qū)域可見。該圖像是使用20倍物鏡從2個月大的C57小鼠上拍攝的。  

圖9 –  在同一大腦切片上進行的高爾基染色和ICC

該sliceGolgi套件來標(biāo)記樹突分支。頂部面板中以20倍物鏡顯示的方框區(qū)域被放大了（63倍），以突出顯示樹突棘（箭頭）和免疫標(biāo)記的神經(jīng)元（箭頭）。這些圖像是從2個月大的C57BL小鼠的額前額葉皮層（體感區(qū)）拍攝的。  

關(guān)于SliceGolgi套件的常見問題解答

·       我正在使用sliceGolgi套件。組織可以在固定劑中保存多長時間？

試劑盒或其他固定劑試劑盒（目錄號：003780）提供的固定劑會影響神經(jīng)元的染色。長時間（幾天到幾周）暴露于固定劑將導(dǎo)致許多軸突被染色，這將阻礙樹突棘的標(biāo)記。

如果給動物灌注固定劑，通常無需固定后。如果必須將組織后固定，則將后組織盡可能短地固定。

·        我正在使用sliceGolgi套件。我可以在Bioenno固定劑固定的組織塊上進行浸漬嗎？

是。可以在組織塊或自由漂浮的部分上進行浸漬。如果您打算在組織塊上而不是在切片上進行浸漬，請在dH2O中沖洗組織塊幾個小時（更換dH2O數(shù)次）以去除多余的固定劑，然后使用浸漬溶液。

·如何將sliceGolgi試劑盒應(yīng)用于器官切片培養(yǎng)物中？

從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)物，在室溫下用0.1 M PB沖洗膜（培養(yǎng)物位于膜上）數(shù)秒鐘（在冷緩沖液中沖洗會導(dǎo)致棘突縮回），并將膜浸入試劑盒提供了固定劑。通常，暴露于固定劑中2-4小時會適合?350 µm切片。長期固定（例如整夜或幾天）可能會增加神經(jīng)元軸突的標(biāo)記。

·       如何使用sliceGolgi試劑盒進行高爾基體染色和免疫組化（IHC或ICC）的結(jié)合？

固定的部分首先在自由流動的條件下進行高爾基染色，然后再進行ICC。為了使合并的反應(yīng)成功，請盡可能短地固定組織，并在2到3天內(nèi)完成神經(jīng)元的浸漬，因為長期暴露于固定劑和/或浸漬溶液中會阻礙許多抗原的表位。除了進行良好的高爾基染色外，用于ICC的抗生物素蛋白HRP檢測系統(tǒng)也應(yīng)該非常靈敏。Bioenno  DAB-Kit  和  DAB-Co Kit  在以下步驟下可以很好地工作：

1）用生理鹽水灌注動物，然后用Bioenno固定劑（試劑盒中提供500毫升；或從固定劑試劑盒，目錄003780中）灌注20?25分鐘。從顱骨上解剖大腦，然后將其儲存在0.1M PB（pH 7.4）中，然后在室溫（?22ºC）下進行振動刀切片（?50微米）。可以在0.1M PB（pH 7.4）中收集切片。 如果灌注不好，將組織后固定1?3小時。

2）在室溫下使用sliceGolgi試劑盒對自由浮動的切片進行高爾基染色。在2到3天內(nèi)完成浸漬。將切片在0.01 M PBS-T中短暫洗滌，然后染色（2?4分鐘）和后染色（?1分鐘）。 如果需要5到7天的神經(jīng)元浸漬，接下來的ICC將非常困難。

3）用PBS-T清洗切片數(shù)分鐘，然后用H2O2（將30 µl原來的30％H2O2倒入10 ml PBS-T中）20分鐘，然后用PBS-T清洗。

4）進行標(biāo)準(zhǔn)ICC：將切片在一抗體中孵育過夜，在PBS-T中洗滌10?15分鐘，然后用生物素偶聯(lián)的第二抗體和抗生物素蛋白-生物素復(fù)合物洗滌。免疫反應(yīng)產(chǎn)物可通過在含有H2O2的DAB或DAB鈷（例如Bioenno DAB或DAB-Co Kit）中孵育切片來觀察。

如果使用生物素標(biāo)記的一抗體，則可以忽略上述生物素偶聯(lián)的第二抗體。 

5）安裝，風(fēng)干，照常清理部分。具有Permount®安裝介質(zhì)的蓋玻片。

SliceGolgi套件引用的一些出版物 

• 跑步誘導(dǎo)的記憶增強與老C57BL / 6小鼠海馬區(qū)CA1細(xì)棘的保存有關(guān) 
  徐本科，孫安邦，何云，馮謙，劉連，*才，羅煥敏（2017），  衰老神經(jīng)生物學(xué)，52，106-116
   
• 神經(jīng)性限制性沉默因子
  Katelin P Patterson，Jeremy M Barry，Megan M Curran，Akanksha Singh-Taylor，Gary Brennan，Neggy Rismanchi，Matias Page，Yoav Noam，Gregory 的神經(jīng)元限制性沉默因子的功能和結(jié)構(gòu)效應(yīng)介導(dǎo)了發(fā)育性高熱驚厥引起的持久性記憶障礙 L Holmes和Tallie Z Baram（2017），  神經(jīng)科學(xué)雜志，3748-16
   

• 急性同時應(yīng)激后多種應(yīng)激激素的收斂協(xié)同作用介導(dǎo)了持久的記憶障礙
  。YuncaiChen，Jenny Molet，Julie C.Lauterborn，Brian H.Trieu，Jessica L.Bolton，Katelin P.Patterson，Christine M.Gall，Gary Lynchand Tallie Z.Baram（2016），   神經(jīng)科學(xué)雜志。 36（44），11295-11307
   
• NRP1在小腦的軸突引導(dǎo)和亞細(xì)胞靶標(biāo)識別中的雙重功能
  Ludovic Telley，Christelle Cadilhac，Jean-Michel Cioni，Alexandre Dayer，Andrea B.Huber，F(xiàn)abrice Ango（2016），  Neuron， 91（6），1-16
   
• FOXP2由相對MEF2C控制皮質(zhì)電路和聲音通訊突觸接線
  易傳陳，蕭穎郭烏爾里希Bornschein，高橋弘，師陳蕓，關(guān)明呂，郝宇陽，桂月陳婧-林瑞，李益新，周云嘉，成信中，錢成廷，沃爾夫?qū)?middot;埃納德，沃夫·海弗，斯萬特·派博，安·米·格雷比爾和劉富欽（2016）。 自然神經(jīng)科學(xué)， 19，1513–1522
   

• 靶向促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素表達神經(jīng)元的轉(zhuǎn)基因小鼠品系中記者表達模式的多樣性。 
  *才，珍妮·莫萊，本杰明·岡恩，凱里·雷斯勒，塔莉·巴拉姆（2015）。 內(nèi)分泌學(xué)，  156（12），4769-4780。
   

• CB 1受體在中性多刺神經(jīng)元上的遺傳拯救可防止興奮性紋狀體突觸的喪失，但不能預(yù)防HD小鼠的運動障礙。
  Naydenov，AV，Sepers，MD，Swinney，K.，Raymond，LA，Palmiter，RD，＆Stella，N.（2014年）。 疾病的神經(jīng)生物學(xué)，  71，  140-150。
   

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