Immunetics DK-B502-032說明書

Bactx®血小板細(xì)菌檢測試劑盒
產(chǎn)品目錄號：DK-B502-032
32個測試
預(yù)期用途：
用于檢測血小板中細(xì)菌的Immunetics®Bactx®細(xì)菌檢測試劑盒是一種快速、定性比色法，用于檢測高達(dá)六（6）單位白細(xì)胞池中的需氧和厭氧革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌。
輸血后四（4）小時內(nèi)匯集的全血源性血小板（血小板減少，白細(xì)胞減少）減少作為質(zhì)量控制試驗。
簡介：
細(xì)菌是血小板單位中常見的污染傳染源。據(jù)估計，單采血小板捐獻(xiàn)的細(xì)菌污染率為1/5000，使血小板成為輸血相關(guān)感染的常見來源。
一
. 因為血小板必須儲存在20-24
為了維持功能，少量的細(xì)菌
大部分是從捐獻(xiàn)者的皮膚中引入血小板，在幾天內(nèi)可以增加到非常高的數(shù)量。
二
. 皮膚菌群
并不是污染血小板單位的僅有的細(xì)菌來源；許多革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌的菌株已在被污染的血小板單位中被鑒定出來，包括葡萄球菌、假單胞菌、芽孢桿菌和鏈球菌。
三
. 為了提高輸血安全性，AABB于2004年3月發(fā)布了指令5.1.5.1，要求血庫和輸血服務(wù)機(jī)構(gòu)對所有血小板單位實施細(xì)菌檢測方法。
四
. 隨著AABB臨時指令5.1.5.1.1的實施，進(jìn)一步的保障措施于2011年1月生效，該指令規(guī)定，此類細(xì)菌檢測方法必須在FDA批準(zhǔn)之前進(jìn)行，或必須證明對FDA批準(zhǔn)的方法具有同等的敏感性。
五
.
Bactx®試劑盒是一種定性比色分析法，通過識別肽聚糖（細(xì)菌細(xì)胞壁中普遍存在的成分）檢測血小板樣品中的細(xì)菌。該試劑盒由凍干肽聚糖檢測試劑、樣品制備試劑、對照品和微膠管組成。在肽聚糖存在下，該分析產(chǎn)生紅色。
表明血小板樣本中存在細(xì)菌的產(chǎn)品。用光度計對反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行檢測，并用基于PC的軟件對結(jié)果進(jìn)行自動解釋。原理：Bactx®檢測檢測白細(xì)胞減少全血源性血小板（LR WBDPS）池中的細(xì)菌。Bactx®檢測可識別革蘭氏陽性、革蘭氏陰性、需氧和厭氧細(xì)菌。本試驗檢測是否存在肽聚糖（pg），肽聚糖是革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌中細(xì)菌細(xì)胞壁的組成部分。
為了測試匯集的血小板是否存在細(xì)菌性PG，從血小板袋中進(jìn)行小體積血小板（0.5 ml）的空間取樣，并將其添加到含有1 ml溶解試劑的微膠管中，并通過倒置進(jìn)行混合。將微膠管短暫離心成不溶性血小板碎片和細(xì)菌細(xì)胞壁碎片（如果存在）。然后將顆粒均勻化。
在0.5毫升的提取試劑中，用移液管上下移動10次。堿性提取試劑能有效地從細(xì)菌細(xì)胞壁釋放PG，達(dá)到良檢測效果。后，將0.5毫升的懸浮液加入含有0.5毫升中和試劑的清潔的微濾管中，倒置混合。
從所得樣品中，將0.3 ml添加到含有凍干檢測試劑的試管中，將試管旋轉(zhuǎn)3秒鐘，然后將試管放入Bactx®閱讀器中。Bactx®讀卡器是一種光度計，可自動監(jiān)測檢測反應(yīng)，并使用安裝在所提供筆記本電腦上的軟件解釋結(jié)果。如果在
在30分鐘的讀取時間內(nèi)，將生成一個“失敗”結(jié)果并伴有聲音警報；否則，將記錄一個“通過”結(jié)果。
Bactx®套件和相關(guān)協(xié)議包含在美國專有技術(shù)7598054和其他未決專有技術(shù)中。

供應(yīng)材料：
1。Bactx®反應(yīng)管（零件號：CB-B005-032）。32個密封玻璃管，每個管含有用于1次試驗的凍干檢測試劑。
2。溶解試劑（部分CC-L001-060）。含有*、表面活性劑和正丁醇的水溶液，1 x 60毫升。
三。提取試劑（零件號CC-E001-060）。*水溶液，1 x 60 ml。
4。中和試劑（零件號CC-N001-060）。4加入慶大霉素的嗎啉丙烷磺酸鹽（MOPS）溶液
作為防腐劑，1 x 60 ml。
5。陽性對照（部分CB-P012-000）。從懸浮在MOPS緩沖液中的枯草芽孢桿菌提取純化肽聚糖，添加慶大霉素作為防腐劑，1 x 1.8 ml。
6。陰性對照（部分CB-N031-000）。添加慶大霉素作為防腐劑的MOPS緩沖液，1 x 1.8 ml。
7。無菌2毫升微型離心管（微型離心管）（零件號AA-T029-000），數(shù)量50。
8。無菌1.5毫升微型離心管（零件號AA-T032-000），數(shù)量50。

所需但未提供的設(shè)備：
1。臺式微型離心機(jī)（可旋轉(zhuǎn)14000–20000 x g）（示例包括Eppendorf 5418和5424型、Beckman Coulter Microfluge 18和Thermo Scientific Sorvall Legend Micro 21）。
2。用于1.5–2毫升微型膠管的機(jī)架。
三。旋渦練習(xí)。第2頁共13頁生效日期：2012年6月8日CF-B502-704
4。校準(zhǔn)單通道1000L微量移液器。
5。無菌一次性1000L移液管（宜帶過濾器）。
6。清潔的一次性液體廢物容器（例如50毫升錐形管或無菌樣品杯）。
7。帶蓋子的無菌容器，用于在制備樣品（微濾片或離心管）之前接收初始血小板樣品。
8。無菌取樣裝置或脫管器、封管器、干凈的刀口（剪刀、手術(shù)刀或分段取樣裝置）。
一次性使用酒備墊。
9。BACTX
畗讀卡器（非調(diào)音部分BTX-001）。
10。筆記本電腦，配備Bactx®分析軟件（非調(diào)節(jié)劑部分AA-C018-000）。
11。個人防護(hù)設(shè)備（包括安全眼鏡）。
12。用于清潔BACTX上管槽的罐裝壓縮空氣
必要時讀取。有關(guān)指南，請參閱Bactx Reader®用戶手冊（Immunitics Doc GN-U0001）。
13。必要時，清潔塑料鑷子，以清除管槽中的碎屑。有關(guān)指南，請參閱Bactx Reader®用戶手冊（Immunitics Doc GN-U0001）。

警告：
1。用于體外診斷。
2。處理工具箱組件時，應(yīng)始終使用丁月青手套（盡量不要使用粉末）。不應(yīng)戴乳膠手套，因為乳膠微粒可能導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
三。為了使試驗達(dá)到適宜、可重復(fù)和準(zhǔn)確的性能，技術(shù)人員應(yīng)接受有關(guān)程序的培訓(xùn)，并且必須遵守本說明書中的所有說明。偏離指示可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。
4。在bactx®分析中使用的所有樣品和材料應(yīng)在生物危害廢物容器中處理。按照OSHA血源性病原體標(biāo)準(zhǔn)（29 CFR 1910-1930）處理所有含血小板的溶液。
5。在進(jìn)行分析時，穿戴適當(dāng)?shù)膫€人防護(hù)裝備，包括安全眼鏡。
6。使用后要蓋緊瓶蓋，避免污染。
7。所有步驟的室溫應(yīng)在19-26°C之間。
8。在分析過程中保持Bactx®讀卡器蓋打開。在分析過程中，不要從Bactx®讀卡器中取出試管。
9。不要使用過期的試劑。一旦打開，Bactx®細(xì)菌檢測試劑盒可使用21天。
10。BACTX®反應(yīng)管含有人血清白蛋白。沒有已知的檢測方法能夠*保證從人類來源獲得的產(chǎn)品不會傳播感染。因此，所有人工來源的材料都應(yīng)被視為具有潛在傳染性。建議使用BACTX
反應(yīng)管的處理應(yīng)符合OSHA關(guān)于血源性病原體的標(biāo)準(zhǔn)，并采取普遍預(yù)防措施。
6在BACTX®反應(yīng)管中含有的人血清白蛋白在FDA批準(zhǔn)的中心被發(fā)現(xiàn)對人類免疫缺陷病毒1型和2型（HIV1/HIV-2）、HIV-1抗原（HIV-1 Ag）、丙型肝炎病毒（HCV）和乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的抗體無反應(yīng)性。
11。陽性對照品含有來源于滅活微生物的成分。沒有一種已知的檢測方法能夠*保證從滅活微生物中獲得的產(chǎn)品不會傳播感染。生物安全2級或其他適當(dāng)?shù)纳锇踩龇☉?yīng)用于含有或懷疑含有傳染源的材料。
12。Bactx®細(xì)菌檢測試劑盒的性能特點是使用混合的、白細(xì)胞減少的全血衍生血小板和CP2D抗凝劑。
13。用戶應(yīng)根據(jù)科學(xué)合理的取樣方法驗證Bactx®分析系統(tǒng)。
限制：
1。合并白細(xì)胞減少的全血源性血小板樣本應(yīng)在從池中取出后2小時內(nèi)進(jìn)行檢測。
2。推薦的72小時宜采樣時間僅基于8種需氧生物的檢測。在檢測研究中，被測厭氧生物沒有生長。查閱性能章節(jié)
特性，見下文。
三。待測血小板應(yīng)在采集后8小時內(nèi)制備，并懸浮于血漿中。
4。為了獲得適宜性能，白細(xì)胞減少應(yīng)在處理（預(yù)儲存）時進(jìn)行。在Bactx®之前進(jìn)行后續(xù)過濾的池
取樣可將白細(xì)胞減少血小板池中的細(xì)菌負(fù)荷降低到低于Bactx®檢測限的水平。

試劑注意事項：
根據(jù)OSHA 29 CFU 1910.1200和適用的歐洲共同體（EC）指令對試劑進(jìn)行分類。
適用的分類、風(fēng)險（R）和安全（S）術(shù)語如下所示。如有要求，可提供材料安全數(shù)據(jù)表。

儲存和穩(wěn)定性：
•將Bactx®反應(yīng)管、萃取劑、對照品和中和劑儲存在2–8°C。
•在2–26°C下儲存分析試劑和微膠管。
•在試劑盒標(biāo)簽上注明失效日期之前，使用Bactx®反應(yīng)管、溶解試劑、提取試劑、陽性對照品、陰性對照品和中和試劑。一旦打開，Bactx®細(xì)菌檢測試劑盒可使用21天。
推薦技術(shù)：
正確清潔工作區(qū)域：
只要使用仔細(xì)的實驗室技術(shù)，并定期進(jìn)行清潔，以防止污染物進(jìn)入試驗試劑中，就可以在工作臺上進(jìn)行該試驗：
•清潔表面，用消毒劑（70%酒精噴霧或類似物）和干凈的紙巾進(jìn)行日常試驗，作為良好的實驗室做法。理想情況下，在進(jìn)行每項試驗之前，應(yīng)進(jìn)行消毒。
•應(yīng)定期清潔樣品制備所需的微量移液器、微型管架、渦流器和離心機(jī)，以避免樣品受到污染。
•工作區(qū)應(yīng)為無通風(fēng)區(qū)，行人流量低。
正確處理樣品：
•搬運(yùn)工具箱組件時，應(yīng)始終使用丁月青手套（盡量不含粉末）。不應(yīng)戴乳膠手套，因為乳膠微粒可能導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
•避免接觸管和蓋的頂部，因為這可能會引入污染物。
•應(yīng)經(jīng)常更換手套，以避免樣品受到污染。
•保持所有管道關(guān)閉，必要時僅短暫打開。這將防止空氣或其他表面的污染。
•在樣品制備過程中，僅使用隨Bactx®試劑盒提供的1.5 ml和2.0 ml微膠管。
樣品類型：
1。為了獲得宜性能，從收集LR-WBDP池中新單元后72小時到第5天結(jié)束時存儲舊單元的池中抽取樣本。
2。血小板應(yīng)從儲存在20-24℃平臺振動篩上的裝置中取樣。

樣品采集：
對于要測試的每個血小板池：
1。在無菌收集管（微型膠卷或帶帽離心管）上用細(xì)尖長久性墨水實驗室標(biāo)記筆寫下池ID。
2。確認(rèn)收集管上的ID與池上的ID相同。
三。使用以下兩種方法之一將至少0.5 ml血小板轉(zhuǎn)移到無菌收集管中：
•要使用經(jīng)批準(zhǔn)的無菌連接設(shè)備，請參閱設(shè)備制造商的說明。第4頁共13頁生效日期：2012年6月8日CF-B502-704
•從新創(chuàng)建的段中取樣：
a.使用管剝離裝置將段中存在的血小板表達(dá)回血小板單元。
b.在不釋放剝離裝置的情況下，將血小板單元翻轉(zhuǎn)幾次。
c.松開剝離裝置，讓血小板流入空段。
d.使用管道密封裝置密封長度為4–6”的管段（遵循制造商關(guān)于正確使用管道密封裝置的說明）。
e.分離管段。
f.將血小板轉(zhuǎn)移到無菌收集管中：
F1。用無菌酒備墊清潔管段的一端。
F2。將段的干凈端直接放在樣本收集容器上。
F3。用干凈的刀口（剪刀、手術(shù)刀或切片取樣裝置）切開切片末端，并將血小板排入收集管。
F4。為了增加血小板在節(jié)段中的流速，從封閉端擠壓節(jié)段并將樣品推向開口或切開節(jié)段的封閉端。
F5。將蓋子放在收集管上。
F6。廢棄空的段和段取樣裝置（如果使用）作為生物危險廢物。
F7。用無菌酒備墊清潔剪刀或手術(shù)刀。
4。收集的血小板樣本應(yīng)在從血小板單元取出后2小時內(nèi)進(jìn)行處理。
5。重復(fù)步驟1-4，多八（8）個血小板池。

試驗程序：
開始測試前執(zhí)行以下步驟：
•從冰箱中取出Bactx®反應(yīng)管、裂解試劑、萃取試劑和中和試劑。使用前，將這些試劑保持在室溫（19–26°C）下45分鐘。
•按照Bactx®讀卡器用戶手冊（文件GN-U0001）中提供的說明打開Bactx®讀卡器并打開Bactx®分析軟件程序。在Bactx®程序窗口中，所有八個頻道都應(yīng)顯示“準(zhǔn)備就緒”。應(yīng)將技術(shù)人員的ID（2-40個字符）輸入到Bactx®軟件窗口頂部的“Technician ID”字段中。
控制：
控制應(yīng)每班運(yùn)行一次，或根據(jù)實驗室的質(zhì)量控制政策。每次校準(zhǔn)Bactx®讀卡器后也應(yīng)運(yùn)行控制裝置。此校準(zhǔn)程序在BACTX中描述
讀者手冊（文件GN-U0001）。每個實驗室負(fù)責(zé)使用BACTX®控制來確定可接受的質(zhì)量。
在特定實驗室環(huán)境和使用條件下監(jiān)測試驗性能的保證計劃。控制溶液直接添加到Bactx®反應(yīng)管中。陽性對照品在使用前必須*旋轉(zhuǎn)，以*重新懸浮肽聚糖溶液。
1。要運(yùn)行控制，首先以大速度旋轉(zhuǎn)正控制管4次，持續(xù)30秒。負(fù)控制管在使用前只需要脈沖渦流。
2。使用一個精細(xì)的長久性實驗室標(biāo)記，通過在Bactx®反應(yīng)管標(biāo)簽上打印的“ID”空白上書寫，將兩個Bactx®反應(yīng)管為正和負(fù)。
三。通過將脫蓋器的帶刺端插入蓋的內(nèi)唇下，從每個BACTX®反應(yīng)管上拆下綠色蓋。輕輕地轉(zhuǎn)動去蓋器以拆下蓋。將綠色蓋棄置在適當(dāng)?shù)膹U物容器中。
4。使用校準(zhǔn)的單通道1000L微量移液器，將0.3ml陽性和陰性對照品轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的Bactx®反應(yīng)管中。
5。以大速度旋轉(zhuǎn)每個Bactx®反應(yīng)管3秒鐘以混合。
6。立即將Bactx®反應(yīng)管放入Bactx®讀卡器。確保反應(yīng)管的底部與Bactx®讀卡器中的井底部接觸。更換BACTX®讀卡器的蓋子。
7。在筆記本電腦上的Bactx®分析窗口中，單擊“Start all samples”（開始所有樣本）按鈕。測試將運(yùn)行30分鐘。按照Bactx®讀卡器用戶手冊中的說明保存分析結(jié)果。
8。在30分鐘分析結(jié)束時，Bactx®分析軟件應(yīng)報告陰性對照管“通過”和陽性對照管“失敗”的結(jié)果。如果控制結(jié)果不符合質(zhì)量保證驗收標(biāo)準(zhǔn)，請聯(lián)系非協(xié)調(diào)人。在沒有令人滿意的控制性能的情況下，不要開始血小板池測試。

Bactx®樣品的制備：
標(biāo)記微膠管和Bactx®反應(yīng)管：
本節(jié)介紹了微膠管和反應(yīng)管的正確標(biāo)簽，以盡量減少樣品混淆和誤認(rèn)的風(fēng)險。圖1說明了標(biāo)記過程的一個示例。
1。將血小板樣本（來自上面的“樣本采集”部分）放在一排微型膠管架中。
2。將2毫升微膠管放在血小板樣品上方一排，每個血小板樣品用1支2毫升微膠管。使用細(xì)尖長久性墨水實驗室標(biāo)記，在其下的血小板樣品上用相同的池ID標(biāo)記每個2毫升的微膠管。確認(rèn)2毫升微膠管上的ID與血小板樣品相同。如果ID不正確，請丟棄2毫升微型膠管，并貼上新的2毫升微型膠管標(biāo)簽。僅使用隨Bactx®套件提供的2毫升微型膠管。
三。將1.5 ml微膠管放在2 ml微膠管上方的一排，每個血小板樣品用1.5 ml微膠管。使用細(xì)尖長久性墨水實驗室標(biāo)記器，在其正下方的2毫升縮微膠管上用相同的ID標(biāo)記每個1.5毫升縮微膠管。確認(rèn)1.5毫升微型膠管上的ID與下面的2毫升微型膠管相同。如果ID不正確，請丟棄1.5毫升的微粉管，并貼上新的1.5毫升微粉管標(biāo)簽。僅使用隨Bactx®套件提供的1.5毫升微型膠管。
4。將Bactx®反應(yīng)管放在1.5 ml微膠管上方的一排，每個血小板樣品有一個反應(yīng)管。在每個Bactx®反應(yīng)管標(biāo)簽上打印的樣品ID空間中，使用細(xì)尖長久墨水實驗室標(biāo)記在每個Bactx反應(yīng)管上寫入與其下方1.5 ml微膠管上相同的ID。

準(zhǔn)備Bactx®樣品：
1。使用單通道1000L微量移液器，將1.0 ml的溶解試劑移到每個空的2 ml微型移液管中。加入溶解試劑后，關(guān)閉各管上的蓋子。
2。用單通道1000L微量移液器，將0.5 ml中和試劑移液到每個空的1.5 ml微型移液管中。加入中和劑后，關(guān)閉各管上的蓋子。
三。從機(jī)架中左邊位置的血小板樣品（圖1中的示例中的p1）開始，使用微量移液器將0.5 ml血小板轉(zhuǎn)移到直接在其上方含有溶解試劑的2 ml微膠管中。
立即蓋上2毫升微膠管上的蓋子，將管倒置3次混合，然后將2毫升微膠管放回機(jī)架中的原始位置。確認(rèn)血小板僅從位于
在2毫升微型膠管的正下方。不要丟棄血小板樣品。對剩余的血小板樣本重復(fù)此步驟，從左到右進(jìn)行操作。
4。在14000–20000xg下對2 ml微粉管進(jìn)行離心3分鐘。一旦離心結(jié)束，小心地將2 ml微粉管放回管架，確保將管放置在與之前*相同的位置。
確認(rèn)2毫升微膠管的ID與血小板樣本上的ID匹配。

第6頁共13頁生效日期：2012年6月8日CF-B502-704
5。打開機(jī)架左邊位置的2毫升試管（圖1中示例中的p1），將試管倒置3秒鐘，將上清液倒入廢物容器中。清除剩余液滴
將倒置的試管輕敲在廢物容器的邊緣，或?qū)⒌怪玫脑嚬茌p敲在干凈、干燥的實驗室紙巾或紙巾上。關(guān)閉管上的蓋。檢查管子，確認(rèn)
白色膠狀顆粒仍然存在。如果顆粒丟失，必須使用另一個0.5毫升血小板制備新樣品。將2毫升試管放回機(jī)架中的位置。對剩余的2毫升微膠管重復(fù)此步驟，
從左到右工作。
6。使用微量移液器和干凈的無菌移液管將0.5 ml提取試劑轉(zhuǎn)移到機(jī)架左邊位置的2 ml微膠管中（圖1中的示例中的p1）。一只手握住2毫升的微粉管，將移液器設(shè)置為0.5毫升，上下移液10次，使移液器活塞回到初始位置，然后*壓下活塞。這項技術(shù)將確保整個體積通過移液管。為避免產(chǎn)生過多的泡沫，上下吸液時，吸液管的開口應(yīng)始終靠近微膠管的底部。將2毫升微型膠管放回機(jī)架中的原始位置。

7。驗證1.5 ml微膠管的ID是否與管架上同一列中2 ml微膠管、血小板樣品和反應(yīng)管上的ID匹配。
8。應(yīng)在Bactx®分析中立即測試樣品。
執(zhí)行Bactx®分析：
1。從Bactx®反應(yīng)管左邊的位置（圖1中的示例中的p1）開始，通過將脫蓋器的帶刺端插入到蓋的內(nèi)唇下，從Bactx®反應(yīng)管上拆下綠色蓋。輕輕地轉(zhuǎn)動去蓋器以拆下蓋。將綠蓋棄置在適當(dāng)?shù)膹U物容器中。返回bactx®
反應(yīng)管在機(jī)架中的原始位置。對其余的Bactx®反應(yīng)管從左到右重復(fù)此步驟。
2。驗證Bactx®反應(yīng)管的ID是否與位于其正下方一行的1.5 ml微膠管上的ID匹配。
三。從左邊位置的1.5 ml微膠管（圖1中的示例中的p1）開始，使用干凈的無菌移液管將0.3 ml從1.5 ml微膠管直接轉(zhuǎn)移到位置的Bactx®反應(yīng)管中。
在上面。對剩余的1.5 ml微粉和Bactx反應(yīng)管從左到右重復(fù)此步驟。
4。以大速度旋轉(zhuǎn)每個Bactx®反應(yīng)管3秒鐘，以混合并將每個Bactx®反應(yīng)管返回機(jī)架中的原始位置。驗證Bactx®反應(yīng)管上的ID是否與位于其正下方一行的1.5 ml微膠管上的ID匹配。
5。將位于管架左邊位置的Bactx®反應(yīng)管放入Bactx®讀卡器的管槽1中。確保反應(yīng)管底部接觸到Bactx®讀卡器的管槽底部。在bactx的sample id字段1中輸入血小板池id。
軟件窗口。驗證輸入到“樣本ID”字段中的樣本ID是否與管架上同一列中1.5 ml、2 ml和血小板樣本管上的ID匹配。對其余的反應(yīng)管從左到右重復(fù)此步驟。
6。應(yīng)將技術(shù)人員的ID（2-40個字符）輸入到Bactx®軟件窗口頂部的“Technician ID”字段中。將所有反應(yīng)管放入Bactx®閱讀器后，單擊“Start all samples”（開始所有樣品）按鈕。測試將運(yùn)行30分鐘。按照bactx®讀卡器用戶手冊中的說明保存bactx®分析結(jié)果。遵循機(jī)構(gòu)處理數(shù)據(jù)文件的指南。