cfPure™血清/血漿游離  DNA（cfDNA） 提取試劑盒

（磁珠法）

目錄號(hào)：K5011610, K5011625

產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品號(hào)：K5011610（100ml 血清/血漿樣本提取試劑盒）

產(chǎn)品號(hào)：K5011625（250ml 血清/血漿樣本提取試劑盒）

儲(chǔ)存條件

該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存 12 個(gè)月。

特點(diǎn)

l 無(wú)毒。

l 高回收率。

l 操作靈活的實(shí)驗(yàn)程序。

l 純化的 DNA 可用于二代測(cè)序(NGS), 熒光定量 PCR 和亞硫酸氫鹽測(cè)序等。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本試劑盒可率從血清/血漿中提取游離 DNA，磁珠法程序適用于多種核酸自動(dòng)化提取 儀，所得游離 DNA 可直接用于 PCR 模  板、qPCR、二代測(cè)序（NGS）和其他應(yīng)用程序。 規(guī)格

100ml 血清/血漿樣本提取試劑盒

250ml 血清/血漿樣本提取試劑盒 質(zhì)量控制 所有試劑均經(jīng)過(guò)純度和有效性測(cè)試。

注意事項(xiàng) 請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)

樣本：新鮮和凍存血清/血漿均可使用，新鮮樣本會(huì)有較高的得率。

量化：每毫升血清/血漿游離 DNA 得率為 1-100 微克。用分光光度法定量（例如. Nanodrop）

可能無(wú)法準(zhǔn)確地測(cè)定得率。可使用 Qubit™  dsDNA High Sensitivity Assay。

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的建議：由于血清/血漿中提取 DNA 多數(shù)為小片段特性，設(shè)計(jì)引物時(shí)需謹(jǐn)

慎。游離 DNA 往往為小片段 170bp 左右，因此，PCR 引物設(shè)計(jì)應(yīng)該生成的產(chǎn)物為小于 150 bp

范圍。健康人血漿游離 DNA 濃度低，PCR 的循環(huán)次數(shù)在某些情況下需達(dá)到 40 個(gè)循環(huán)。

treck Cell-Free DNA BCT Tube(s) 基因檢測(cè)無(wú)創(chuàng)采血管:  無(wú)創(chuàng)管經(jīng)蛋白酶 K 處理可分離高質(zhì)

量的無(wú)細(xì)胞 DNA，否則 DNA 得率會(huì)減少 50%。

自備設(shè)備和試劑

l     移液管

l     渦流混合器

l     磁力架

l     1.5 ml 不黏離心管

l     無(wú)水乙醇

使用前：裂解/結(jié)合液 Lysis/Binding Buffer 及 Wash Buffer 洗滌液為濃縮液。若溶液發(fā)生 沉淀，放置 37°C 水浴中預(yù)熱 30 分鐘，以溶解沉淀。*次使用試劑盒時(shí)，請(qǐng)按照提示在裂 解/結(jié)合液 Lysis/Binding Buffer 及洗滌液 Wash Buffer 加入無(wú)水乙醇，儲(chǔ)存 2-8°C 有效期一年， 蓋緊瓶蓋以確保長(zhǎng)期存儲(chǔ)。

產(chǎn)品號(hào)：K5011610

l    加入 23ml 無(wú)水乙醇至裂解/結(jié)合液 Lysis/Binding Buffer 中，輕輕顛倒混勻。

l     加入 51 ml 無(wú)水乙醇至每個(gè)洗滌液 Wash Buffer 中，輕輕顛倒混勻。

l     每次提取前配制新鮮 80%乙醇。

產(chǎn)品號(hào)：K5011625

l    加入 19ml 無(wú)水乙醇至每個(gè)裂解/結(jié)合液 Lysis/Binding Buffer 中，輕輕顛倒混勻。

l 加入 51 ml 無(wú)水乙醇至每個(gè)洗滌液 Wash Buffer 中，輕輕顛倒混勻。

l 每次提取前配制新鮮 80%乙醇。

實(shí)驗(yàn)前確定要提取的血清/血漿量（100µl~10ml  均可），按下表計(jì)算所需裂解/結(jié)合液

Lysis/Binding Buffer 和 Magnetic Bead Solution 磁珠溶液使用量。

*5ml 或以上血清/血漿建議使用 50ml 離心管，使用 15ml 離心管造成泄露會(huì)造成得率降低。

蛋白酶 K 處理

如果樣品使用基因檢測(cè)無(wú)創(chuàng)采血管 Streck Cell-Free DNA BCT Tube(s)采集，蛋白酶 K 處理可

確保高回收率。非該采血管采集的樣本可直接進(jìn)行裂解/結(jié)合 Lysis/Binding 步驟。

1. 加入適量血清/血漿到適合的離心管中。

2. 每 1ml 血清/血漿加入 15 µl 蛋白酶 K（20 mg/ml）。

3. 每 1ml 血清/血漿加入 50 µl SDS（20%）溶液。

4. 顛倒混勻 5 次。

5. 60°C 孵育 20 分鐘。

6. 冰上預(yù)冷 5 分鐘，放置室溫。

7. 放置室溫后可進(jìn)行裂解/結(jié)合 Lysis/Binding 第二步

裂解/結(jié)合 Lysis/Binding

1. 加入適量血清/血漿到適合離心管中。

2. 每 1ml 血清/血漿加入 1.25ml 裂解/結(jié)合液 Lysis/Binding Buffer。

3. 每 1ml 血清/血漿加入 25µl 磁珠溶液 Magnetic Bead Solution。 注意：加入之前混勻磁珠溶液，確保溶液無(wú)磁珠沉淀。磁珠會(huì)迅速下沉所以每次加樣前都 要混勻磁珠，以免造成 DNA 得率不一致。

4. 室溫渦流混合或用力搖動(dòng)離心管 10 分鐘。*為獲得高產(chǎn)量，確保血樣本/緩沖溶液在管內(nèi)混 合，推薦使用旋渦混合器。

5. 將離心管置于磁力架磁分離 2~5 分鐘或直至溶液清透。

6. 保持離心管置于磁力架上小心去除上清，不要觸碰磁珠。

7. 保持離心管置于磁力架上 1 分鐘，去除殘液。

*次洗滌

8. 加入 1000µl 洗滌液 Wash Buffer 至第 7 步裂解/結(jié)合 Lysis/Binding 管中。 9. 渦流混合 10 秒或移液管吹打 6 次重懸磁珠。

10.  將重懸液移至 1.5ml 離心管置于磁力架。

11.  置于磁力架 10~30 秒。

12.  移液管抽取上清至裂解/結(jié)合 Lysis/Bindin 管。

13. 將裂解/結(jié)合 Lysis/Bindin 管中剩余磁珠全部移至 1.5ml 離心管。

14.  1.5ml 離心管置于磁力架磁分離 10~30 秒至液體清澈。

15.  用 1000µl 移液槍頭盡量去除上清。

16. 用裝有離心管的磁力架輕輕敲擊實(shí)驗(yàn)臺(tái) 5 次，用 200µl 移液槍頭去除廢液。

17.  離心管移至試管架上加入 1000µl 洗滌液 Wash Buffer。

18.  渦流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重懸磁珠。

19.  短暫離心。*離心僅用于渦流混合之重懸磁珠，短暫離心僅為去除離心管蓋上的吸附液體。

20.  離心管置于磁力架磁分離 10~30 秒。

21.  用 1000µl 移液槍頭盡量去除上清。

22. 用裝有離心管的磁力架輕輕敲擊實(shí)驗(yàn)臺(tái) 5 次，用 200µl 移液槍頭去除廢液。

第二次洗滌

23.  離心管移至試管架上加入 1000µl 乙醇（80%）。

24.  渦流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重懸磁珠。

25. 短暫離心。

26.  離心管置于磁力架磁分離 10~30 秒至溶液清澈。

27.  用 1000µl 移液槍頭盡量去除上清。

28. 用裝有離心管的磁力架輕輕敲擊實(shí)驗(yàn)臺(tái) 5 次，用 200µl 移液槍頭去除廢液。

29.  離心管移至試管架上加入 1000µl 乙醇（80%）。

30. 渦流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重懸磁珠。

31. 短暫離心。

32.  離心管置于磁力架磁分離 10~20 秒。

33.  用 1000µl 移液槍頭盡量去除上清并保持管蓋打開(kāi)。

34.  用裝有離心管的磁力架輕輕敲擊實(shí)驗(yàn)臺(tái) 5 次。

35.  用 200µl 移液槍頭去除廢液。

36. 保持管蓋打開(kāi) 2 分鐘，磁力架輕輕敲擊實(shí)驗(yàn)臺(tái) 5 次，用 200µl 移液槍頭去除廢液。

37.  繼續(xù)干燥 1-3 分鐘。*注意不要過(guò)分干燥以免磁珠粘在管壁上。

洗脫

38.  離心管移至試管架上加入適量洗脫液 Elution Buffer。注意：建議每毫升血清/血漿加入 12.5

µl 洗脫液 Elution Buffer 以確保*得率。 39.  渦流混合或用力搖動(dòng)離心管 5 分鐘。

40. 短暫離心。

41.  置于磁力架 10~30 秒。

42.  上清移至新 1.5ml 離心管。